DNA含量与滑膜肉瘤预后关系

　　DNA含量分析技术是80年代以来迅速发展的一门新型检测技术，已广泛应用于肿瘤临床及基础理论的研究。其中流式细胞术(Flowcytometry,FCM)是一种快速定量分析细胞核DNA含量的技术，其在推测患者预后及治疗反应上具有重要的价值[1]。滑膜肉瘤的组织结构复杂，目前尚无统一的分类及预后判定标准。研究表明，滑膜肉瘤患者的预后与其肿瘤细胞核的有丝分裂率有一明显的相关性[2]，因此，我们拟应用FCM对其进行回顾性研究，探讨DNA含量在滑膜肉瘤患者预后判定中的作用。

　　1　材料与方法

　　1.1临床资料

　　1.1.1资料选择选择1984年至1993年在我院进行诊治的原发滑膜肉瘤52例，病例资料完整，术前均未进行化疗及放疗，行软组织肿瘤扩大切除术，术后采用VAMC方案进行化疗。其中男性30例，女性22例;**之比1.4:1，34例分布于 30～50岁之间，占本组资料的65.5%。

　　1.1.2肿瘤大小、局部浸润及临床分期52例肿瘤最大直径21cm，最小直径2cm，其中6例≤5cm，余46例肿瘤直径均>5cm。经病理证实6例局部骨侵袭，7例区域淋巴结转移。根据软组织肉瘤临床分期标准进行临床分期[3]，其中Ⅲa6例，Ⅲb33例，Ⅲc7例，Ⅳa6例。

　　1.1.3随访本组资料平均随访日期为41个月，最长为62个月，最短为17个月。所有患者术前均经X线证实无1例肺转移，治疗后经X线证实肺转移21例。

　　1.1.4病理分型对全部病理资料重新进行复查，根据肿瘤细胞有向上皮成分和梭形成分双向分化的趋势，将滑膜肉瘤分为单相型及双相型。

　　1.2滑膜肉瘤流式细胞分析及方法

　　1.2.1样品来源确含肿瘤组织的石蜡包埋的组织块在切片机上切取35μm厚组织片7片，经二脱蜡，梯度乙醇水化，胃蛋白酶消化，再以300目尼龙筛网滤去未消化的组织碎片，用75%的乙醇固定制备好的单细胞，4℃保存，备检。

　　1.2.2制备好的单细胞悬液涂片，HE染色，显微镜下检查肿瘤消化情况，了解单细胞悬液的产量。1.2.3应用溴化乙啶一步插入法进行染色，检测前弃去待测样品中的乙醇将细胞调整至1×104个/ml，在其内加入5%的鸡红细胞作对照与标本同步染色。

　　1.2.4用美国产FACS-420型流式细胞仪检测样品，波长488nm，功率为300mW的氩离子为激发光源，变异系数稳定在5%以内，每例标本测定1.5万～2.5万个细胞，平均为2万个。

　　1.3结果判定

　　1.3.1DNA指数(DNAIndex)表示DNA倍体水平DI=测定细胞(G0/G1峰均道值)/内标细胞(G0/G1峰均道值)×2.85

　　本实验内标细胞为鸡红细胞，测定二倍体的鸡红细胞DNA含量为正常人淋巴细胞含量的35%，故乘常数2.85。依据DI值判定DNA倍体，本组资料以DI=0.9～1.10为二倍体及近二倍体，其它为异倍体。

　　1.3.2细胞周期细胞周期由计算机确定G0/G1期、S期、M/G2期三期细胞的道数范围后，将落在各自道次上的细胞数叠加总合而得。增殖细胞指数PI=[(S+M/G2)/(G0/G1+M/G2+S)]×100%。

　　1.4统计学方法

　　所得数据均值比较用t检验，百分率比较用χ2检验，以P<0.05为显著水平。

　　2　结果

　　2.1滑膜肉瘤DNA含量

　　表1　单相型、双相型滑膜肉瘤的DI期、S期、PI比较

　　              例数           DI值           异倍体比例   

         Ⅲa          6             1.08±0.04              50

　　Ⅲb        33             1.29±0.09              15.2

　　Ⅲc          7             1.60±0.08            100

　　Ⅳa          6             1.89±0.10            100

　　2.2DNA含量与滑膜肉瘤分期及病理类型的关系

　　52例滑膜肉瘤各期异倍体的比例分别为Ⅲa50%、Ⅲb15.2%、Ⅲc100%及Ⅳa100%(表 2)，异倍体的出现机率并不随着肿瘤分期的进展而增加，但晚期滑膜肉瘤异倍体检出率为100%。52例滑膜肉瘤中单相型和双相型分别为33例和19例，单相型占本组资料63.4%，其中单相型滑膜肉瘤DI指数、S期道数及增殖细胞指数(PI)均较双相型高(表2)，且二者差异显著(P<0.05)，说明单相型肿瘤细胞具有更高的增殖率。

　　表2　52例滑膜肉瘤各期异倍体的比例及DI值

　　              单相型         双相型         P值

　　DI        1.64±0.24     1.24±0.02       <0.05

　　S        27.69±3.1      14.46±1 .82      <0.05

　　PI      42.21±6.40　29.76±4.18　<0.05

　　3　讨论

　　80年代以来迅速发展起来的流式细胞技术已成为判断人类恶性肿瘤预后的标准，研究表明肿瘤细胞DNA倍体水平与肿瘤的分化、生长方式、淋巴转移及肿瘤患者的预后密切相关，且恶性程度高的肿瘤DNA非整倍体的检出率也高[4]。由于各家使用不同型号的流式细胞仪和不同的标准细胞，DNA组方图差异甚大，以G0/G1峰的DI值更能说明细胞的DNA含量，同时便于数据的相互比较及处理[5]。

　　本组资料表明，单相型滑膜肉瘤在滑膜肉瘤占有较高的比例，且单相型滑膜肉瘤有较高的S期及M/G2期比例及较高的肺转移率，预后较差。作者认为对滑膜肉瘤患者应积极采取根治手术，术后配合应用S期特异物杀伤残存的肿瘤干细胞，防止肿瘤细胞继续增殖及转移，可望提高滑膜肉瘤的生存率。