肠道病毒所致各系统感染实验检查

      【实验检查】

　　（一）周围血象 白细胞计数大多正常，在某些肠道病毒感染时可增高，中性粒细胞也可增多。

　　（二）病毒分离 一般都采取咽拭及粪便作病毒分离和检定，尚可从病人的脑脊液、胸水、心包积液、血液、疱浆以及活检或尸检取得的组织中分离到病毒。标本取得后，应立即送检。可接种于猴肾、人胚肾、人羊膜、人二倍体或Hela细胞、KB传代细胞中进行组织培养，观察细胞病变。同时用多种组织培养细胞进行分离可提高阳性率。阳性标本再以特异型的免疫血清作中和试验进行型别鉴定。疑有柯萨奇A组病毒感染者，应将标本经皮下、腹腔内或脑内途径接种乳鼠进行病毒分离，因其组织培养阳性率不高。柯萨奇B组病毒亦可使乳鼠致病。

　　（三）血清免疫学试验 采取双份血清，测定型特异抗体水平。一般可用中和试验、补体结合试验、酶联免疫吸附试验（ELISA，酶标法）、放射免疫等法进行测定，其中以中和试验最为可靠，中和抗体消 失最慢，型特异性也较强。如恢复期抗体水平比早期有≥4倍上升，则有极大的诊断意义。但因肠道病毒型别众多，血清学中和试验工作量大，只有当某地一已知型肠道病毒流行时，以此法进行诊断比较理想。

　　（四）免疫荧光快速诊断法 以荧光染色的免疫抗体来鉴定抗原可达到快速诊断的目的。但目前除在脊髓灰质炎病毒感染时应用外，在肠道病毒感染时采用不多，因需备各种型特异的免疫血清，手续繁多。最近采用许多血清型共有的VP3-ZC抗原和一种与多血清型的VP1衣壳蛋白交叉反应的单克隆抗体，改进了免疫诊断方法，但目前仍停留于研究阶段。

　　（五）核酸杂交法 由于不同血清型的肠道病毒基因组间存在同源性，特别是5′端非编码区部分区域高度保守，故可供核酸杂交，使近年来对肠道病毒鉴定有了新的飞跃。采用探针有以下三种：①cDNA探针，以病毒RNA某一片段为模板，由逆转录酶催化产生，大多克隆在质粒载体中，再把带有显色基因（生物素或地高辛）或同位素的核苷酸掺入到新合成的cDNA链中去，加以标记，若将标本先经12～24小时组织培养可提高阳性率。②RNA探针-由于RNA是单链分子，故它与靶序列的杂交反应效率极高，一般用特异的转录载体克隆肠道病毒RNA探针，混合几种RNA探针可使检测病毒型更广，RNA探针在特异性和敏感性方面都优于cDNA探针。③寡核苷酸探针，较上述二种探针有下面优点。因其链短，与等量靶位点完全杂交时间短，且可识别靶序列内一个碱基的变化，可检测点突变，又可大量合成，价廉。此探针因选择5′端非编码区共同序列，故可牢固而特异地同大多数临床常见肠道病毒结合。为了克服标本中肠道病毒滴度太低的问题，近年采用PCR法将单一基因或短DNA序列放大，再与探针杂交，此法已应用于临床。在肠道病毒中枢神经系统感染流行时，从脑脊液中检测肠道病毒RNA，阳性率高，可在24小时内得结果，比病毒培养平均需6～8天快得多。临床标本用PCR扩增后，再与非同位素标记肠道病毒探针杂交，数小时即有结果，大大有助于临床确诊。